發(fā)布時(shí)間： 2021-02-02 點(diǎn)擊次數： 740次
ATCC細胞使用切忌與手接觸，要用潔凈的藥勺，量筒或滴管取用，不允許用同一種工具同時(shí)連續取用多種試劑。取完一種試劑后，應將工具洗凈(藥勺要擦干)后，才可取用另一種試劑。
ATCC細胞的傳代培養操作步驟：
1.吸掉或倒掉培養瓶?jì)扰f培養液。
2.向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌敢汉虴DTA混合液少量。以能覆蓋培養瓶底為宜。
3.置37℃孵箱或室溫(25℃)下進(jìn)行消化，2-5min后把培養瓶放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察，當發(fā)現胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后，應立即中止消化。
4.吸出消化液，向瓶?jì)燃尤際anks液少量，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘留消化液沖掉，然后再加培養液。如果僅使用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接加入少量含血清的培養液，終止消化。
5.使用彎頭吸管，吸取瓶?jì)扰囵B液，按順序反復輕輕吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，以防用力過(guò)猛損傷細胞。
6.用計數板計數后，分別接種于新的培養瓶中，置CO2培養箱中進(jìn)行培養。
7.細胞培養換液時(shí)間應根據細胞生長(cháng)的狀態(tài)和實(shí)驗要求來(lái)確定。一般2-3d后應換一次生長(cháng)液。待細胞鋪滿(mǎn)器皿底面，即可使用；也可繼續傳代擴大培養或換成維持液。
相關(guān)注意事項：
1.掌握好細胞消化的時(shí)間，消化時(shí)間過(guò)短時(shí)，細胞不宜從瓶壁脫落，過(guò)長(cháng)的消化會(huì )導致細胞脫落、損傷。
2.掌握好消化濃度，當消化液濃度過(guò)高時(shí)，消化時(shí)間應縮短，過(guò)低時(shí)細胞消化時(shí)間相對延長(cháng)。
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