配對抗體的制備與篩選

配對抗體指的是可以同時(shí)結合在一個(gè)抗原分子上的兩個(gè)抗體。配對抗體，一般應用于雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗。

抗體配對的原理

通常情況下，一個(gè)抗原分子擁有多個(gè)抗原決定簇，將抗原注射入動(dòng)物體內進(jìn)行免疫，針對不同的抗原決定簇會(huì )產(chǎn)生不同的抗體。產(chǎn)生的抗體具有特異性與專(zhuān)一性，即一個(gè)抗體分子只會(huì )特異性地結合一個(gè)抗原決定簇。兩個(gè)針對不同抗原決定簇的抗體，有可能同時(shí)結合到抗原分子上。如果兩個(gè)抗體同時(shí)結合到同一個(gè)抗原分子上，那么這兩個(gè)抗體就是配對抗體。

配對抗體的制備與篩選

需要注意的是，即使兩個(gè)抗體針對的是不同的抗原決定簇，也并不意味著(zhù)這兩個(gè)抗體分子一定可以同時(shí)與抗原分子結合。當一個(gè)抗體與抗原結合后，有可能會(huì )導致其他結合位點(diǎn)（抗原決定簇）構型的改變，從而導致其他的抗體無(wú)法正常結合到抗原上。位阻效應的存在，也可能使兩個(gè)結合位點(diǎn)距離較近的抗體無(wú)法同時(shí)結合在抗原上。因此想要得到可以同時(shí)結合在抗原分子上的配對抗體，在制備出抗體后，還需要對得到的抗體進(jìn)行篩選。這就意味著(zhù)，要制備配對抗體，要完成以下兩步工作：抗體的制備；配對抗體的篩選。

抗體制備

 為了便于后續的篩選，制備的抗體應為單克隆抗體，通常利用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行單克隆抗體的制備。 注意：如果單克隆抗體很少，很可能會(huì )找不到可以配對的抗體，因此，在免疫動(dòng)物的時(shí)候，應多免疫幾只動(dòng)物，以獲得更多的單克隆抗體。

配對抗體的篩選

通常，配對抗體篩選的方法是雙抗夾心 ELISA 法。篩選的原理為：在得到了單克隆抗體后，從中取出兩種單克隆抗體，一種作為捕獲抗體，另一種作為標記抗體（HRP 酶標記），將捕獲抗體包被在抗原板上，先加入抗原，孵育后洗去未結合的抗原，再加入標記抗體 孵育后洗去未結合的標記抗體，最后加入顯色液顯色。如果可以顯色，說(shuō)明標記抗體與抗原特異性結合，該捕獲抗體與標記抗體為一對配對抗體。如果不能顯色，說(shuō)明標記抗體不能與抗原結合，從而被洗脫，該捕獲抗體與標記抗體不是配對抗體。如果選擇的兩種單克隆抗體不能進(jìn)行配對，則需重新選擇兩種單抗，重新進(jìn)行試驗，直至找出可以配對的抗體。

 配對抗體的應用

利用雙抗夾心法對目的抗原進(jìn)行定性定量的檢測，必須要用到可以同時(shí)與目的抗原結合的配對抗體。對于比較常見(jiàn)的目的抗原，可以通過(guò)購買(mǎi)試劑盒的方式得到相應配對抗體。但是市面上試劑盒的種類(lèi)有限，有些目的蛋白在市面上無(wú)法買(mǎi)到對應的試劑盒，為了進(jìn)行雙抗夾心法 ELISA 實(shí)驗，需進(jìn)行相應的配對抗體的生產(chǎn)。