抗體形式及抗體純化

對于血清、腹水和組織培養上清的澄清，離心和過(guò)濾是基本的實(shí)驗室技術(shù)。這些技術(shù)可以去除會(huì )阻塞層析柱的脂類(lèi)和小顆粒物質(zhì)。對于某些 樣品，緩沖液置換和除鹽也是必要的步驟。硫酸銨沉淀作為更進(jìn)一步的預處理步驟，經(jīng)常用于濃縮腹水中的免疫球蛋白。

抗血清

多克隆抗體通常是未經(jīng)純化的，稱(chēng)為血清或抗血清?？寡迨侵敢呀?jīng)除去了凝血蛋白和血紅細胞的免疫宿主的血液?？寡灏蟹N類(lèi)的 抗體/免疫球蛋白以及其它血清蛋白。它所包含的不僅有識別靶抗原的抗體，還有識別非靶抗原的抗體，在免疫分析中有時(shí)會(huì )發(fā)生非特異性反 應。由于這個(gè)原因，粗制抗血清通常要進(jìn)行純化，以去除血清蛋白，增加能特異和靶抗原相結合的免疫球蛋白的比例。

組織培養上清

單克隆抗體可以通過(guò)雜交瘤細胞培養（細胞分泌性抗體）并收獲雜交瘤組織培養上清來(lái)獲得。腹水單克隆抗體可以通過(guò)在小鼠（或大鼠）的腹腔中生長(cháng)雜交瘤細胞而產(chǎn)生。雜交瘤細胞注射入小鼠以后，就會(huì )在小鼠腹腔繁殖并產(chǎn)生液體（腹 水）。這種腹水就包含了高濃度的可收獲抗體，比雜交瘤細胞培養有更高的抗體產(chǎn)量。

抗體純化

多克隆抗血清或單克隆腹水/組織培養上清通常通過(guò)下述三種方法中的一種來(lái)進(jìn)行純化：

1.蛋白A/G純化

蛋白 A/G 純化是應用金黃色葡萄球菌的蛋白 A 或鏈球菌的蛋白 G 對免疫球蛋白 Fc 段的高親和性。蛋白 A/G 純化從粗制抗血清中去除了血清 蛋白，但沒(méi)有去除非特異的免疫球蛋白組分。結果蛋白 A/G 純化的抗血清仍然具有一小部分不期待的交叉反應性。

2.親和純化

親和純化就是通過(guò)相似性分離某一特定蛋白或具有相似特征的一組蛋白。這種分離蛋白的技術(shù)是基于在蛋白和耦合于層析介質(zhì)上的特定配基 之間的一種可逆的相互作用。 抗原親和純化的優(yōu)勢是免疫球蛋白能夠特異性地同刺激它產(chǎn)生的抗原進(jìn)行結合，結果消除了大量的非特異免疫球蛋白成分，將能特異與靶抗 原相結合的免疫球蛋白成分富集。因此親和純化后獲得的主要是含所期待的特異性免疫球蛋白。

3.預吸附

多克隆抗體有時(shí)要經(jīng)過(guò)預吸附。也就是說(shuō)它們要被不同物種來(lái)源的其它蛋白或血清吸附，以消除可能的交叉反應的抗體。這樣純化后的抗體 純度和特異性應很高，任何交叉反應都被顯著(zhù)減少。

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