發(fā)布時(shí)間: 2022-07-21 點(diǎn)擊次數: 518次
傳統轉染試劑有一定的細胞毒性,在轉染過(guò)程由于提高細胞的通透性因而不能在培養基中添加抗生素如陽(yáng)離子脂質(zhì)體。帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內吞。
Gibco血清中含有大量的蛋白質(zhì),在轉染過(guò)程中,帶負電的蛋白質(zhì)可能干擾陽(yáng)離子脂質(zhì)體對核酸的吸附,影響轉染效率。另外,使用脂質(zhì)體等轉染試劑時(shí),由于含血清轉染會(huì )將血清中的蛋白帶入細胞,引發(fā)細胞毒性,導致轉染效率降低,故不能有血清轉染。這些轉染試劑要求在轉染前換無(wú)血清培養基,轉染后4-6h在更換成有血清培養基,這其實(shí)是為了減輕轉染造成的細胞毒性。
可使用非脂質(zhì)體的轉染試劑,比如納米材料試劑,轉染過(guò)程中就可以加血清,這樣也可以提高細胞轉染效率。
不同細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的??稍谝淮螌?shí)驗前做一個(gè)預實(shí)驗,細胞是否加血清,對不同的細胞是有不同的影響的,有些細胞是可以有血清的,有些加Gibco血清就會(huì )受影響。所以,普通的轉染試劑一定要進(jìn)行預實(shí)驗和條件優(yōu)化。
細胞毒性的大小往往意味著(zhù)對細胞生理活動(dòng)影響的大小。這會(huì )對相關(guān)研究數據產(chǎn)生嚴重的干擾,甚至影響研究的結論。因此,選擇一種高效方便的轉染試劑是細胞轉染成功的關(guān)鍵。