發(fā)布時(shí)間： 2023-02-14 點(diǎn)擊次數： 350次
ATCC細胞在不加任何條件下直接凍存時(shí)，細胞內和外環(huán)境中的水都會(huì )形成冰晶，能導致細胞內發(fā)生機械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、PH改變、蛋白變性等，能引起細胞死亡。如向培養液加入保護劑，可使冰點(diǎn)降低。在緩慢的凍結條件下，能使細胞內水份在凍結前透出細胞。貯存在-130℃以下的低溫中能減少冰晶的形成。
ATCC細胞可能由于各種原因相互附著(zhù)并發(fā)生結團。細胞結團的常見(jiàn)的原因是在細胞裂解之后，培養基中存在游離DNA和細胞碎片，DNA的粘性使細胞和其他碎片聚集成大的團塊。以下是細胞裂解和DNA被釋放到培養基中的一些原因：
1.消化過(guò)度：過(guò)度使用蛋白水解酶可能會(huì )導致細胞結團。
2.環(huán)境應力：機械力、反復凍融循環(huán)和其他環(huán)境應力可加速細胞死亡，早期現象可能是細胞和細胞粘附。
3.組織分解：通過(guò)化學(xué)、機械或酶法從初生組織制備單細胞懸浮液可能會(huì )導致一些細胞破裂。從組織制備單細胞懸浮液時(shí)，通常需要膠原酶消化細胞外基質(zhì)。
4.過(guò)度生長(cháng)：當細胞達到融合狀態(tài)時(shí)，細胞碎片和細胞裂解產(chǎn)生的游離DNA就會(huì )堆積過(guò)多。
那么我們該如何預防細胞結團呢？細胞結團會(huì )減少細胞對關(guān)鍵營(yíng)養素的獲取，從而阻礙整體細胞的生長(cháng)。細胞結團還會(huì )影響需要清潔制備單個(gè)細胞的下游檢測，根據結團的根本原因，下找出合理的解決方案：
1.細胞裂解與DNA釋放：DNaseⅠ可用于組織降解以及常規細胞培養過(guò)程中，以防止多種類(lèi)型細胞的結團。
注意：DNaseⅠ在二價(jià)離子（如Mg2+，Ca2+）存在時(shí)活性大。
2.二價(jià)陽(yáng)離子：檸檬酸鹽和EDTA等螯合劑可以用于去除細胞培養基中的鈣離子。也可使用無(wú)血清、無(wú)Ca2+/Mg2+平衡鹽溶液。
3.細胞密度：細胞在傳代前，參考細胞系文獻或者已知的特性來(lái)獲取推薦的細胞密度。
4.操作：在進(jìn)行細胞分離時(shí)，應小心處理細胞并使用適當的離心機設置。微小的結團可以通過(guò)攪碎，或者輕柔地上下吹打細胞來(lái)解決。
5.支原體污染：處理掉被污染的細胞，消毒培養室和細胞培養箱。遵循良好的實(shí)驗室規范以避免污染。
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