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在收集標本前需有一個(gè)完整的計劃,需要清楚要檢測的成份是否足夠穩定。ELISA檢測提倡新鮮標本盡早檢測,對收集后當天就進(jìn)行檢測的標本,及時(shí)儲存在4℃備用,如有特殊原因需要周期收集標本,請取材后,將標本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。因冰室與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實(shí)驗質(zhì)量,所以避免反復凍融。
◇ 液體類(lèi)標本:
包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
◇ 血清:
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
◇ 細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應再次離心。
◇ 組織標本:
切割標本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。