原代細胞的常見(jiàn)問(wèn)題 有哪些？

問(wèn)：原代細胞和細胞系有什么區別？

答：原代細胞直接源自組織，一旦培養，原代細胞的壽命是有限的。原代細胞是理想的，因為它們保留了體內觀(guān)察到的許多標記。細胞系是不斷生長(cháng)和復制并經(jīng)歷遺傳轉化的細胞群，具有無(wú)限的生長(cháng)潛力。出于醫學(xué)和/或研究目的，細胞系已在體外維持。細胞系可以通過(guò)非常大量的傳代培養進(jìn)行培養，并且在非常高的傳代次數下可能會(huì )發(fā)生進(jìn)一步的基因型/表型變化。一般來(lái)說(shuō)，細胞系缺乏體內觀(guān)察到的許多標記，并且也顯示出與原代細胞非常不同的標記譜。

問(wèn)：ScienCell 如何確認細胞類(lèi)型？

A. 細胞類(lèi)型可以通過(guò)多種方式確認。細胞形態(tài)學(xué)非常重要，可以幫助我們識別正確的細胞。此外，我們的質(zhì)量控制部門(mén)使用免疫熒光來(lái)確認特定細胞類(lèi)型的識別標記的存在。免疫熒光也可用于識別污染細胞。

問(wèn)：我可以獲得有關(guān)我的批次細胞的哪些捐贈者信息？

答：我們保存所有人類(lèi)和動(dòng)物原代細胞的記錄。如果您有特定要求（年齡和/或性別），請在訂購前聯(lián)系我們的客戶(hù)服務(wù)部門(mén)。

問(wèn)：我們是否對我們的細胞進(jìn)行人類(lèi)白細胞抗原分型？

答：人類(lèi)白細胞抗原 (HLA) 分型是一種確定一個(gè)人的組織與另一個(gè)人的組織匹配程度的方法。我們目前不在 ScienCell 研究實(shí)驗室對此進(jìn)行測試。

問(wèn)：我的原代細胞瓶是否 100% 純？

答：原代細胞永遠不會(huì )是 100% 純的，但是，我們會(huì )盡力獲得盡可能純的細胞?？偸谴嬖谖廴炯毎?。

問(wèn)：我需要多少經(jīng)驗才能開(kāi)始使用正常原代細胞？

答：強烈推薦具有在無(wú)菌條件下使用層流罩工作的經(jīng)驗，并且具有使用其他細胞類(lèi)型的經(jīng)驗是有利的。如果您是細胞培養的初學(xué)者或想建立細胞培養實(shí)驗室，我們可以為您提供幫助。請聯(lián)系我們的細胞培養專(zhuān)家。

問(wèn)：收到后我應該如何處理冷凍保存的細胞？

A. 收到包裹后，立即將冷凍保存的細胞從干冰運輸容器轉移至液氮中?？焖購倪\輸容器轉移到液氮中，以防止細胞解凍。請勿將細胞儲存在 -20°C 或 -80°C 下，因為這會(huì )對細胞造成不可逆轉的損壞。

問(wèn)：當我第一次對凍存細胞進(jìn)行平板培養時(shí)，是否需要離心細胞以去除 DMSO？

答：我們不建議通過(guò)離心細胞來(lái)去除 DMSO 殘留物。離心過(guò)程對細胞的危害可能比 DMSO 殘留物更大，特別是如果使用不適當的高速。當您鋪板細胞時(shí)，DMSO 將在培養基中充分稀釋。例如，如果將整個(gè)冷凍管（1 毫升）細胞放入裝有 15 毫升培養基的 T-75 燒瓶中，則 DMSO 濃度將低于 0.67% (v/v)。如果以 5000 - 10,000 個(gè)細胞/cm2 鋪板細胞，DMSO 的濃度會(huì )更低。

問(wèn)：我應該使用什么類(lèi)型的培養箱來(lái)培養 ScienCell 原代細胞？

我們建議使用 37°C、5% CO ₂培養箱培養來(lái)自 ScienCell 的所有原代細胞。所有 ScienCell 培養基都需要 5% CO ₂來(lái)維持細胞的最佳 pH 值。

問(wèn)：如何用冷凍保存的細胞建立培養物？

A. 注意：詳細說(shuō)明請參閱電池產(chǎn)品表。

1. 從液氮中取出一小瓶細胞，注意保護手和眼睛。

2. 將小瓶上的蓋子擰松 1/4 圈 10 秒，以釋放可能滯留在螺紋中的液氮，然后重新擰緊蓋子。

3. 將冷凍小瓶放入 37°C 水浴中。握住并輕輕旋轉小瓶，直至內容物全部解凍。迅速從水浴中取出小瓶，用 70% 乙醇擦拭，然后轉移至無(wú)菌區。

4. 小心地取下蓋子，不要接觸內螺紋。輕輕地將小瓶中的內容物重新懸浮并分配到含有培養基的平衡的聚-L-賴(lài)氨酸或纖連蛋白包被的培養容器中（請參閱產(chǎn)品表上列出的具體說(shuō)明）。

5. 蓋上培養容器的蓋子或蓋子，輕輕搖動(dòng)容器以使細胞均勻分布。如有必要，松開(kāi)蓋子以進(jìn)行氣體交換。

6. 將培養容器放回培養箱（37°C，5% CO2/95% 空氣）。

7. 為了獲得最佳結果，培養開(kāi)始后至少 16 小時(shí)內不要擾動(dòng)培養。第二天刷新培養基以去除殘留的 DMSO 和未貼壁的細胞（除非產(chǎn)品表上另有說(shuō)明）。

問(wèn)：我應該向細胞培養瓶中添加多少體積的培養基？

A. 建議在 T-25 燒瓶中添加 5 ml 培養基，在 T-75 燒瓶中添加 15 ml 培養基，在 T-150 燒瓶中添加 30 ml 培養基。

問(wèn)：我應該多久更換一次原代細胞的細胞培養基？

答：請參閱您正在使用的細胞類(lèi)型的產(chǎn)品表以獲取具體說(shuō)明。一般來(lái)說(shuō)，根據細胞的融合情況，每 2-3 天更換一次培養基。注意：冷凍保存的細胞解凍并鋪板后，應在約 16 小時(shí)后進(jìn)行第一次培養基更換，以去除 DMSO 殘留和死細胞。

問(wèn)：我應該在什么匯合處傳代細胞？

答：這取決于細胞類(lèi)型。例如，內皮細胞永遠不應該變得太匯合（90%-100%），因為這會(huì )促進(jìn)污染細胞的生長(cháng)并導致內皮細胞衰老。另一方面，成纖維細胞可以在較高的匯合度（90%-98%）下進(jìn)行傳代培養，并且不會(huì )受到較高匯合度的不利影響。一般來(lái)說(shuō)，原代細胞不應該變得太匯合，因為這會(huì )導致細胞衰老并促進(jìn)污染細胞的生長(cháng)。

問(wèn)：正常原代細胞的推薦分流比是多少？

答：ScienCell 研究實(shí)驗室不推薦正常細胞的分流比，因為胰蛋白酶消化后的細胞數量各不相同。我們建議在胰蛋白酶消化后對細胞進(jìn)行計數，并按照產(chǎn)品表上針對特定細胞類(lèi)型推薦的接種密度接種細胞。

問(wèn)：群體倍增和傳代次數有什么區別？

答：群體倍增是指培養物中細胞總數增加兩倍，最常在指數或“對數"生長(cháng)階段提及。術(shù)語(yǔ)傳代次數是指將細胞群從培養容器中取出并進(jìn)行傳代培養（傳代）過(guò)程的次數，以保持細胞處于足夠低的密度以刺激進(jìn)一步生長(cháng)。

問(wèn)：我可以使用正常原代細胞進(jìn)行多少次傳代？

答：ScienCell 不使用術(shù)語(yǔ)“傳代"來(lái)描述增長(cháng)潛力，因為每個(gè)客戶(hù)使用不同的分流比。ScienCell 研究實(shí)驗室在細胞產(chǎn)品表上標出了預期的群體倍增次數。

問(wèn)：非增殖細胞可以傳代培養嗎？

A. 非增殖細胞不能進(jìn)行傳代培養，因為它們不增殖。這包括以下細胞類(lèi)型：神經(jīng)元、小膠質(zhì)細胞、巨噬細胞和其他一些細胞類(lèi)型。產(chǎn)品表將表明細胞是否不增殖。

問(wèn)：我可以重新冷凍 ScienCell 的正常原代細胞嗎？

答：我們不建議客戶(hù)重新冷凍 ScienCell 的人類(lèi)和動(dòng)物原代細胞。

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