粗制膠原酶制劑含有兩種不同膠原酶的幾種亞型：一種巰基蛋白酶、梭菌蛋白酶、一種胰蛋白酶樣酶和一種氨肽酶。這種膠原蛋白水解和蛋白水解活性的結合可有效分解細胞間基質(zhì)，這是組織解離的重要部分。該復合物的一個(gè)成分是水解酶，它優(yōu)先降解序列 Pro-Y-Gly-Pro 中的 Y-Gly 鍵處的天然膠原蛋白的螺旋區域，其中 Y 最常見(jiàn)的是中性氨基酸。這種裂解產(chǎn)生的產(chǎn)物易于進(jìn)一步被肽酶消化。粗膠原酶會(huì )被半胱氨酸、EDTA 或鄰菲咯啉等金屬螯合劑抑制，但 DFP 不會(huì )。它還受到α2-巨球蛋白（一種大的血漿糖蛋白）的抑制。Ca2+ 是酶活性所必需的。每種膠原酶的特定酶譜與獲得研究細胞的組織（或與細胞的用途）相關(guān)，并且由于這種相關(guān)性，沃辛頓建立了幾種類(lèi)型的粗制膠原酶：類(lèi)型 1、2、3 和 4。

• 1 型粗膠原酶具有膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶和胰蛋白酶活性的原始平衡。
• 2 型含有較高相對水平的蛋白酶活性，特別是梭菌蛋白酶。
• 3 型含有很低水平的次級蛋白酶。
• 4 型的胰蛋白酶活性特別低，以限制對膜蛋白和受體的損害。
• 5 型 含有較高的膠原酶和酪蛋白酶值。
• 6 型 含有高膠原酶活性，酪蛋白酶與膠原酶的比例約為 2:1。相對于 I 型 ( G列 ) 而言，旨在富集 II 型 ( H列 ) 膠原酶。
• 7 型 膠原酶和酪蛋白酶活性比 1 型和 2 型膠原酶高四倍。

•純化的膠原酶，代碼：CLSPA，含有極低的次級蛋白水解活性以及高膠原酶活性。

Worthington 還提供每種類(lèi)型的 0.22 µm 過(guò)濾制劑，以預包裝形式直接重構并用于細胞分離和培養程序。酶類(lèi)型和不同組織的有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，部分原因是使用參數的可變性。盡管如此，大多數研究人員認為粗制膠原酶批次的組織分型是一項有價(jià)值的服務(wù)。關(guān)于沃辛頓膠原酶和污染物測定的詳細說(shuō)明可以在沃辛頓酶手冊中找到。此外，組織特定的參考資料和詳細的分離條件可以在《沃辛頓組織解離指南》中找到。

膠原酶測定是Mandl的改進(jìn)，其中將膠原酶與天然膠原一起溫育5小時(shí)，并且使用Moore和Stein， JBC，176，367，(1948)比色茚三酮方法測定膠原分解的程度。釋放的氨基酸以每毫克膠原酶的微摩爾亮氨酸表示。

用途：粗膠原酶廣泛用于酶促原代細胞分離和組織解離程序。大多數研究人員使用粗制膠原酶制劑，例如 1、2、3 和 4 型或色譜純化的膠原酶（代碼：CLSPA）；后者通常與彈性蛋白酶、透明質(zhì)酸酶等輔助酶結合。為了獲得最佳結果，必須根據待解離的組織定制蛋白水解活性的精確混合物。不同組織的類(lèi)型和有效性之間的相關(guān)性良好，但并不很好，并且可能部分取決于使用參數和目標以及批次之間的差異。有關(guān)更多信息，請參閱膠原酶采樣計劃信息。沃辛頓還出版了《組織解離指南》，其中提供了有關(guān)用于這些應用的酶的更多信息以及多種細胞和組織類(lèi)型的具體參考。

相關(guān)產(chǎn)品：

膠原蛋白 (CL)
脫氧核糖核酸酶 I (DP/D/DCLS/D2/DPFF/DPRF)
彈性蛋白酶 (ES/ESL/ESFF)
透明質(zhì)酸酶 (HSE/HSEP)
中性蛋白酶（Dispase、NPRO）
木瓜蛋白酶 (PAP/PAPL/PAP2) 蛋白酶 K (PROK)
胰蛋白酶 (TL/TRL/TRL3/TRLS/TRTPCK)
胰蛋白酶抑制劑 (LBI/OI/SI/SIC)

細胞分離優(yōu)化系統 (CIT)
肝細胞分離系統 (HIS)
新生兒心肌細胞分離系統 (NCIS)
木瓜蛋白酶解離系統 (PDS/PDS2)