培養基常見(jiàn)問(wèn)題

一、如何選用培養基?   選擇培養基沒(méi)有一定標準，有幾點(diǎn)建議可供參考：

1. 建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞第一個(gè)選的培養基?？梢圆殚單墨I，或在購買(mǎi)細胞株時(shí)咨詢(xún)。

2. 根據細胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗的需要來(lái)選擇培養基。如小鼠細胞株多選1640；進(jìn)行細胞雜交、基因轉移實(shí)驗，可選擇IMDM。

3. 用多種培養基培養目的細胞，觀(guān)察其生長(cháng)狀態(tài)，可以用生長(cháng)曲線(xiàn)、集落形成率等指標判斷，根據實(shí)驗結果選擇最佳培養基，這是最客觀(guān)的方法，但比較繁瑣。

4.ATCC（American Type Culture Collection）收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開(kāi)ATCC網(wǎng)頁(yè)的Cells and hybridomas鏈接，輸入細胞名稱(chēng)就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來(lái)源，培養和凍存條件，以及相關(guān)文獻等資料。

二、液體培養基可以放-20℃保存嗎？

不可以！因為在-20℃下，培養基中的鹽容易析出，培養基融化后，有的鹽可能無(wú)法重新溶解，從而導致培養基滲透壓降低，培養細胞時(shí)，細胞容易破裂而死亡。   

三、新配制的液體培養基能保存多久？

我們建議將新配制的培養基放置于4℃，避光保存盡量在一周內使用完畢。培養基越新鮮越好。

四、培養基中添加了血清和抗生素后，可長(cháng)期保存嗎？

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開(kāi)始降解。

五、培養基中是否須添加抗生素？

除了特殊篩選系統外，一般正常培養狀態(tài)下，培養基中不應添加任何抗生素。

為防止細菌、真菌污染，可以加入青霉素-鏈霉素雙抗溶液，其培養基中的終濃度為青霉素100U/ml，鏈霉素為100ug/ml。   

六、為何培養基保存于4℃冰箱中，顏色會(huì )偏暗紅色，且pH值越來(lái)越偏堿性？

培養基保存于4℃冰箱中， 培養基內之CO₂ 會(huì )逐漸溢出，造成培養基越來(lái)越偏堿性。而培養基中之酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會(huì )隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿之結果， 將造成細胞生長(cháng)停滯或死亡。若培養基偏堿時(shí)， 可以通入無(wú)菌過(guò)濾之CO₂， 以調整pH 值。

七、培養液pH是怎樣影響細胞生長(cháng)的？

由于大多數細胞適宜PH值為7.2-7.4，偏離此范圍對細胞將產(chǎn)生有害的影響。各種細胞對PH值要求也不全部相同，原代細胞培養一般對PH值變動(dòng)耐受差，無(wú)限細胞系耐受力強。 但總體來(lái)說(shuō)，細胞耐酸性比耐堿性強一些，偏酸環(huán)境中更有利于細胞的生長(cháng)。因此，配制培養用液時(shí)可把液體的PH值稍微調的偏酸一些。液體在經(jīng)過(guò)0.1um或0.2um濾膜過(guò)濾時(shí)，PH值會(huì )向上浮動(dòng)0.2左右。

八、為什么液體培養基1640顏色發(fā)黃，是pH值不對嗎？

不是。因為配方原因，1640為堿酚紅型，其中酚紅的濃度只有DMEM的四分之一，所以是因為酚紅濃度低，而非PH值低。

九、為什么有客戶(hù)要求培養基中不含酚紅？

研究表明，酚紅可以模擬固醇類(lèi)激素的作用（特別是雌激素）。為避免固醇類(lèi)反應，細胞培養，尤其是哺乳類(lèi)細胞時(shí)，用不加酚紅的培養基。由于酚紅干擾檢測，一些研究人員在做流式細胞檢測時(shí)，不使用加酚紅的培養基。

十、放置在冰箱中的培養基顏色會(huì )發(fā)生變化，為什么？

培養基保存于4℃冰箱中，培養基內CO₂會(huì )逐漸溢出，造成培養基越來(lái)越偏堿性。而培養基中酸堿指示劑（通常為phenol red）的顏色也會(huì )隨堿性增加而更偏暗紅。培養基偏堿后再用于細胞培養將造成細胞生長(cháng)停滯或死亡。培養基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過(guò)濾的CO₂，以調整pH值。

十一、無(wú)血清培養與有血清培養使用的抗生素量一樣嗎？

當在無(wú)血清培養基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養基中所使用濃度的50%。因為血清中的蛋白會(huì )結合和滅活一些抗生素。而在無(wú)血清培養條件下，抗生素不被滅活。

十二、培養基各個(gè)成分的作用有哪些？

1.NaHCO₃的作用是什么？

與二氧化碳一起形成緩沖系統，保持培養基PH值穩定。

2.丙酮酸鈉的作用是什么？

丙酮酸鈉可以作為細胞培養中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是如果沒(méi)有葡萄糖的話(huà)，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。丙酮酸鈉的貯存液濃度一般為50mM，-20℃保存，培養基中的終濃度為1mM.

3.加入HEPES有何好處？

培養基中經(jīng)常用的Buffer system是碳酸氫鹽，它可提供營(yíng)養，但卻在生理PH值條件下會(huì )降低緩沖能力。而HEPES是一種很強的Buffer，加入HEPES能使細胞培養基在PH7.2-7.6條件下緩沖能力增強。HEPES的貯存液濃度一般為1M，常溫保存。培養基中的終濃度為25mM，即5ml 1M的HEPES加入到200ml全部培養基中。

4.酚紅的作用是什么？

酚紅在培養基中被用來(lái)作為PH值指示劑：中性時(shí)為紅色，酸性時(shí)為黃色，堿性時(shí)為紫色。

5.谷氨酰胺的作用是什么？

幾乎所有的細胞對谷氨酰胺都有較高的要求。谷氨酰胺脫掉氨基后，可作為培養細胞的能量來(lái)源，參與蛋白質(zhì)的合成和能量代謝。在缺少谷氨酰胺時(shí)，細胞生長(cháng)不良而死亡。所以，各種培養液中都含有較大量的谷氨酰胺。

谷氨酰胺在溶液中很不穩定，應置-20℃冰凍保存，用前加入培養基中。加有谷氨酰胺的液體培養基4度冰箱儲存兩周以上時(shí)，應重新加入原來(lái)量的谷氨酰胺。

試驗操作中常配制高濃度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分裝使用，-20℃保存。使用時(shí)，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml全部培養基中，使其終濃度為2mM培養基。