CUBIC組織透明化試劑——應用實(shí)例更新

CUBIC Trial Kit是一款用于透明化技術(shù)CUBIC（Clear, Unobstructed Brain/Body Imaging Cocktails and Computational analysis）的試劑盒。

該方法由上田泰己教授和洲崎悅生教授等人開(kāi)發(fā)。

只需將組織浸入試劑盒包含的溶液中，即可對小鼠大腦和全組織、靈長(cháng)類(lèi)的全腦和甲殼類(lèi)的全組織進(jìn)行透明化處理和折射率調整。

該方法有望應用于病理學(xué)研究和單細胞水平中的觀(guān)察。

數據提供：

國立研究開(kāi)發(fā)法人理化學(xué)研究所上田泰己教授、洲崎悅生教授

◆CUBIC特點(diǎn)

● 操作簡(jiǎn)單（只需浸入溶液）

● 可透明化整個(gè)器官

● 小鼠全腦透明化只需兩周

可進(jìn)行透明化的組織

小鼠大腦和全組織，靈長(cháng)類(lèi)全腦，魚(yú)類(lèi)、甲殼類(lèi)、甲蟲(chóng)等的全組織，骨骼（需進(jìn)行脫鈣處理）

CUBIC Trial Kit試劑盒組成

1. ScaleCUBIC-1 Solution——250 mL x 1支

2. ScaleCUBIC-2 Solution——250 mL x 1支

3. Mounting Solution-1——40 mL x 1支

4. Mounting Solution-2——40 mL x 1支

透明化處理需準備

▼ 試劑：

1. CUBIC Trial Kit

2. 多聚甲醛（產(chǎn)品編號：160-16061）

3. PBS×1（產(chǎn)品編號：164-25511）

▼ 實(shí)驗用具：

1. 5 mL/15 mL/30 mL/50 mL錐形管（配合樣品使用）

2. 搖床

3. 用于觀(guān)察CUBIC透明化樣品的熒光顯微鏡※和推薦物鏡※※

※共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、光片顯微鏡

※※與折射率 (RI=1.49)相匹配的物鏡。

建議在使用之前咨詢(xún)顯微鏡制造商。

◆CUBIC實(shí)驗方案事例

透明化實(shí)驗方案示例（完整器官）

請注意，組織透明化實(shí)驗方案中所用試劑用量、處理時(shí)間需根據樣品尺寸進(jìn)行調整。此外，建議在灌注固定后，取出并重新固定樣品。

各個(gè)步驟中使用的試劑量約為12-15 mL，清洗時(shí)建議使用試劑量的5-10倍。

*每2天更換新溶液

**建議以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用

免疫組織染色實(shí)驗方案示例

腦組織塊的免疫染色案例，詳細實(shí)驗方案請見(jiàn)參考文獻（1）

*每2天更換新溶液

**分別用以下溶液稀釋抗體

一抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.5% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

二抗：0.1% (v/v) Triton X-100, 0.1% (w/v) bovine serum albumin, 0.01% (w/v) sodium azide in PBS

***建議以2 : 8、3：7的比例混合 (RI = ～1.49) 試劑盒中的Mouting Solution 1 和 2 使用。