CST測試ELISA試劑盒的可靠性

發(fā)布時(shí)間： 2024-03-22　　點(diǎn)擊次數： 172次

即用型 ELISA 試劑盒無(wú)需科研工作者花費時(shí)間摸索優(yōu)化條件，因此可以簡(jiǎn)化研發(fā)的工作流程。其中至關(guān)重要的是，科研工作者選擇的 ELISA 試劑盒需要具有批次間高度可重復性，才能得到如預期的項目進(jìn)展。如果您的實(shí)驗持續很長(cháng)，但所使用的 ELISA 試劑盒批號中途變更了，那您需要確保新、老批次的表現是一致的、產(chǎn)生相似的信號/空白比，且任何批次間差異需在可接受的變異系數 (%CV) 值范圍內。

抗體作為 ELISA 試劑盒的核心組分，與可重復性危機密切相關(guān)，即人們日益認識到的許多科學(xué)實(shí)驗無(wú)法重復。確保實(shí)驗可重復，需要研究人員謹慎選擇產(chǎn)品，并且要求抗體制造商確保高質(zhì)量、經(jīng)過(guò)很?chē)栏耱炞C的產(chǎn)品供科研工作者使用。至關(guān)重要的是，抗體應對其靶標表現出高度特異性，并應在其所適用的應用中都經(jīng)過(guò)嚴格驗證。

在 CST，開(kāi)發(fā)和上市銷(xiāo)售抗體時(shí)，我們堅持遵守 Hallmarks of Antibody Validation^™，以確保您獲得自己可以信任的數據。對于不同的抗體，會(huì )選擇這六種補充性驗證策略中合適的方法對抗體進(jìn)行嚴格驗證，進(jìn)而確?？贵w在任何測定法中的特異性、靈敏度和功能性符合要求。這意味著(zhù)，當選擇 CST^® 抗體時(shí)，該抗體的性能保證在我們公司產(chǎn)品保證范圍內。

我們的抗體是即用型 FastScan^™、PathScan^® 和 PathScan^® Rapid Protocol (RP) ELISA 試劑盒的基礎，所有這些試劑盒均使用雙抗夾心法，與直接和間接 ELISA 相比，靶標特異性更加優(yōu)異。在設計和生產(chǎn) ELISA 試劑盒時(shí)，通過(guò)確定最佳抗體對并預先進(jìn)行所有試劑盒的開(kāi)發(fā)和驗證，來(lái)確保您項目全程數據的質(zhì)量。

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作為產(chǎn)品科學(xué)家，在 CST 工作的6年間，我的大部分職責是測試公司 ELISA 試劑盒的批間差異，以確保批次間的一致性?？茖W(xué)可重復性是 CST 的核心價(jià)值觀(guān)，這在我們嚴格驗證標準中已體現。最終，我們希望無(wú)論客戶(hù)收到哪一批次的試劑盒，他們的研究可以不中斷，且結果可信任。通過(guò)按照公司既定的標準操作規程 (SOP) 生產(chǎn)每個(gè)批次的ELISA 試劑盒，可確保研究人員獲得的結果具有一致性、可靠性。

ELISA 試劑盒批次測試要求

在向研究人員提供任一新批次 ELISA 試劑盒之前，我們都進(jìn)行一系列全面測試。這些測試起到確認新批次對目的靶標具有高度特異性（低背景信號）、與當前批次相當的靈敏度和具有產(chǎn)生寬動(dòng)態(tài)范圍靈敏度曲線(xiàn)的能力。

我們會(huì )進(jìn)行如下測試：

有陽(yáng)性對照和陰性對照的測試

根據 ELISA，用于驗證目的的對照可以是生物學(xué)相關(guān)的樣品或靶標蛋白內源水平已知（高表達和低表達）的樣品。通過(guò)同時(shí)用老批次和新批次的 ELISA 試劑盒生成不同蛋白質(zhì)濃度下吸光度信號變化的平行滴定曲線(xiàn)，我們可以確認各數據集間的關(guān)聯(lián)。由于每個(gè)模型系統都不同，我們建議客戶(hù)參考我們的滴定曲線(xiàn)來(lái)確定自己的樣品上樣蛋白質(zhì)濃度。

由于我們的 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒是對相對（而非絕對）定量進(jìn)行驗證，因此它們不包含標準品。相反，我們建議樣品可依據蛋白質(zhì)含量或細胞數進(jìn)行標準化。不過(guò)，FastScan 試劑盒會(huì )提供凍干的陽(yáng)性對照，以驗證分析性能。

光密度 (OD) 信號閾值

對于待驗證的 ELISA 試劑盒批次，陽(yáng)性對照樣品必須具有大于 1.5 的絕對光密度 (OD) 值，而空白樣品的信號閾值應低于 0.3。在測試我們的 PTM 特異性 ELISA 試劑盒時(shí)，我們還設置了適當的誘導閾值，以確保磷酸化對照樣品的信號顯著(zhù)高于陰性非磷酸化對照樣品的信號。

此外，相對于最高滴定點(diǎn)，新批次ELISA 試劑盒的信號/空白比必須大于5.0。該值必須落入類(lèi)似于現有批次的范圍內，以便新批次符合我們的可重復性標準。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的信號/空白比數據摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批
0.075	18.3	16.9
0.0375	11.9	11.9
0.01875	7.8	7.7
0.009375	4.8	4.8

變異系數百分比 (%CV) 值

驗證新 ELISA 試劑盒批次的另一個(gè)關(guān)鍵參數是 %CV。為了生成該值，我們對新批次中隨機選擇的三個(gè)板條運行滴定曲線(xiàn)，以確定每個(gè)重復的平均值 (μ) 和標準差 (SD，σ)，然后應用以下公式：

%CV = (σ / µ) x 100

對于待放行的新批次，現有批次與新批次之間的分析間差異必須小于 15%。

PathScan^® Phospho-SMAD2 (Ser465/467)/SMAD3 (Ser423/425) Sandwich ELISA Kit #12001 的變異系數百分比 (%CV) 數據摘要
濃度 (mg/ml)	#12001 第 34 批	#12001 第 35 批	標準差	%CV
0.075	2.734	3.115	0.040	1.28
0.0375	1.781	2.201	0.030	1.34
0.01875	1.166	1.425	0.028	1.93
0.009375	0.710	0.894	0.015	1.66

為了確保我們的 ELISA 試劑盒隨時(shí)間推移性能保持一致，同時(shí)沒(méi)有信號的衰減，我們通常在保質(zhì)期過(guò)半時(shí)進(jìn)行質(zhì)量控制 (QC) 跟進(jìn)測試。

為您的下一次 ELISA 實(shí)驗提供高質(zhì)量結果

即用型 ELISA 試劑盒可以為您的研究帶來(lái)許多益處，前提是要從可靠的制造商購買(mǎi)這些產(chǎn)品。您的測定結果的與使用的抗體高度相關(guān)。在 CST，我們使用經(jīng)嚴格驗證的高質(zhì)量抗體作為 FastScan、PathScan 和 PathScan RP ELISA 試劑盒的基礎，每個(gè)新批次在可供給客戶(hù)之前都經(jīng)過(guò)全面測試。通過(guò)核實(shí)每個(gè)新批次的 ELISA 試劑盒與先前的具有相當的性能，我們旨在確保您的項目按計劃進(jìn)行，而無(wú)任何計劃外的中斷。

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