發(fā)布時(shí)間： 2021-09-14 點(diǎn)擊次數： 613次
ATCC細胞的說(shuō)明書(shū)中有關(guān)于細胞復蘇和傳代的詳細步驟。除說(shuō)明書(shū)外，還有另一份重要文件-COA（Certificate of Analysis）。COA中包含具體批次信息，如每管細胞的數量，建議復蘇使用的培養基用量，已知細胞的傳代代次等重要信息。
部分培養基如DMEM，各廠(chǎng)商提供產(chǎn)品雖然名稱(chēng)相同，但成分也會(huì )有差異。為了保證細胞大的復蘇率和維持細胞特性，建議購買(mǎi)細胞的時(shí)候，同時(shí)購買(mǎi)ATCC細胞的培養基。
篩選ATCC細胞株的兩種技術(shù)介紹：
1.轉染質(zhì)粒后，單克隆方法篩選穩定細胞系
對大多數細胞轉染效率較低。對于基因過(guò)表達，如果轉染效率達到40%，基因過(guò)表達尚可。但是對于基因干擾實(shí)驗，對轉染效率要求遠遠高于基因過(guò)表達，通常質(zhì)粒轉染無(wú)法滿(mǎn)足。
另外，質(zhì)粒游離于細胞質(zhì)中，很快降解，無(wú)法滿(mǎn)足較長(cháng)時(shí)間的檢測項目；質(zhì)粒轉染整合幾率極低，穩定細胞株構建耗時(shí)耗力，且得率很低，往往需要挑取單克隆株。
2.病毒感染篩選穩定ATCC細胞株
病毒感染方法較質(zhì)粒轉染篩選單克隆方法更方便和高效，是目前主流的穩定細胞系篩選方法。用慢病毒制備穩轉細胞株，由于其高效整合、高效轉錄、高效表達、宿主范圍廣，感染效率高，且與細胞染色體整合而不發(fā)生基因重排，是制備穩定細胞株的理想載體。
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