發(fā)布時(shí)間： 2022-03-10 點(diǎn)擊次數： 555次
ATCC細胞轉化試驗有形態(tài)計數法、MTT法和同位素法三種。MTT法即四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法，MTT是一種噻唑鹽，化學(xué)名3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，水溶液為黃橙色。小鼠脾細胞受到ConA作用后發(fā)生增殖活化，其胞內線(xiàn)粒體琥珀酸脫氫酶活性相應升高，MTT作為其底物參與反應，形成藍色的甲臜（Formazan）顆粒沉積于細胞內或細胞周?chē)?，?jīng)鹽酸─異丙醇溶解后為藍色溶液，可用酶標測定儀測定細胞培養物的OD值，測定波長(cháng)570nm，根據OD值的大小計算反應體系中細胞增殖程度。
ATCC細胞觀(guān)察培養時(shí)的主要事項說(shuō)明：
1.肉眼觀(guān)察細胞培養基顏色，再借助顯微鏡觀(guān)察細胞生長(cháng)情況，并對細胞進(jìn)行不同倍數拍照（建議收到時(shí)的培養瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細胞100X，200X各一張），這樣做可方便后期的對比。
2.用75%的酒精消毒（75%的酒精的水要經(jīng)過(guò)殺菌處理）。
3.嚴格按照在無(wú)菌環(huán)境下操作的原則，打開(kāi)細胞培養瓶。
4.將細胞培養瓶?jì)鹊呐囵B基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（要換新的培養基培養細胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml，顯微鏡下觀(guān)察細胞變圓，輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。
7.換新的細胞培養瓶，37℃，5%CO2培養。
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