判斷血清質(zhì)量的4種技巧

第一種：接種率測試

進(jìn)行接種率測試可以?xún)?yōu)化出一個(gè)最合適的血清使用濃度?？梢?/span>把新到批次的血清按不同的濃度比例配制成血清細胞培養基，例如5%、10%、15%和20%濃度的血清細胞培養基。然后以10-100個(gè)細胞/mL的濃度進(jìn)行接種，并分別使用上述不同血清濃度的血清細胞培養基進(jìn)行培養2周，觀(guān)察細胞的不同濃度下的細胞存活率以及細胞集落的面積變化，從而得出一個(gè)最合適的血清濃度。

例如，10%和15%的結果都可以接受的話(huà)，則應使用10%進(jìn)行培養，一方面可以節省血清使用，其次也可以降低血清存在時(shí)對細胞生長(cháng)產(chǎn)生的其他不可控影響因素。

第二種：生長(cháng)曲線(xiàn)

從生長(cháng)曲線(xiàn)可以判斷不同批次間的血清對細胞生長(cháng)的影響。以正常培養的濃度進(jìn)行細胞接種，并觀(guān)察記錄細胞達到不同的密度所需要用到的時(shí)間。

例如，如果細胞使用這一批次的血清時(shí)，其生長(cháng)停滯期的時(shí)間較長(cháng)，說(shuō)明細胞需要對這個(gè)批次的血清進(jìn)行較長(cháng)時(shí)間的適應后才能正常生長(cháng)；如果細胞進(jìn)入指數增長(cháng)期后，倍增速度快，也就是長(cháng)得很快，說(shuō)明這批次的血清對細胞的生長(cháng)促進(jìn)效果很明顯；如果細胞進(jìn)入平臺期后，其密度比以往的血清批次要更高，說(shuō)明該批次的血清的經(jīng)濟效率更高，反之亦然。

可以直接用MTT繪制細胞的生長(cháng)曲線(xiàn)，也可以用可連續觀(guān)察的細胞計數儀或觀(guān)測系統。

第三種：細胞特征觀(guān)察

細胞特征觀(guān)察用于判斷該血清是否會(huì )存在一些影響因子，對細胞的基因表達產(chǎn)生影響。

這個(gè)實(shí)驗對藥物篩選、需要細胞定向分化或分泌物進(jìn)行的項目非常有必要。

觀(guān)察細胞特征，除了要對細胞的形態(tài)特征進(jìn)行判斷，還需要從分子和蛋白水平去檢測對比。

例如在正常培養階段，提取細胞RNA進(jìn)行待研究的基因的表達分析，看看血清是否會(huì )對該基因的表達產(chǎn)生上調或抑制，如果有，那說(shuō)明該血清的存在可能會(huì )影響你的課題實(shí)驗的結果準確性。

第四種：血清污染物的檢測

通常商業(yè)化的血清出廠(chǎng)前都會(huì )進(jìn)行嚴格的微生物清除，但仍有極少數可能有部分的血清會(huì )存在支原體的污染，或在實(shí)驗室進(jìn)行血清分裝時(shí)帶入了微生物的污染。

因此，我建議，有條件的同學(xué)在使用血清前，應該先取一點(diǎn)血清或已配制完成的血清細胞培養基進(jìn)行空白培養，觀(guān)察其是否存在細菌、真菌等微生物的污染，確認沒(méi)有問(wèn)題后再進(jìn)行正式的細胞培養。

而支原體污染的風(fēng)險，則只能通過(guò)PCR、熒光染色等進(jìn)一步的實(shí)驗方法進(jìn)行檢測了。

這里還需要特別強調的一點(diǎn)是，有的同學(xué)會(huì )通過(guò)看血清的顏色是否紅、橙紅來(lái)判斷血清質(zhì)量，這是玄學(xué)，沒(méi)有科學(xué)依據。

血清的顏色如果較紅，代表其在采集過(guò)程中，動(dòng)物出現了一定程度的溶血，這和采集工藝有關(guān)，和血清本身質(zhì)量無(wú)關(guān)。

另外，血清解凍后，有時(shí)會(huì )看到有一些絮狀物，這種絮狀物也不一定是微生物污染，有可能是血清內的蛋白質(zhì)凝集而成的。

它的存在可能對細胞產(chǎn)生刺激，不利于細胞生長(cháng)，但血清還是可以用的，這些絮狀物體積大無(wú)法通過(guò)過(guò)濾去除，我們可以嘗試離心完成清除后繼續使用該瓶血清。