ELISA 實(shí)驗常見(jiàn)問(wèn)題原因分析及解決辦法

高背景值？

可能原因是洗板不充分、讀數時(shí)沒(méi)有擦拭板底。

解決辦法是檢查洗板是否按要求進(jìn)行，讀數前擦拭板底，板底有手印或水漬導致值偏高

無(wú)信號值？

可能原因是試劑配制錯誤、標準品溶解后放置時(shí)間過(guò)久或反復凍融。

解決辦法是檢查是否存在試劑配制錯誤，避免溶解后的標準品重復使用，每次實(shí)驗使用新的標準品

過(guò)強的信號值？

可能原因是streptavidin-hrp加樣量過(guò)高。

解決辦法是檢查SA-HRP是否按要求的濃度配制

重復性差，可能原因是加樣量不均一、加樣時(shí)需懸空加樣，避免劃破包被面，引起抗體的損失

標準蛋白反應好，但樣本未檢測到信號？

可能原因是樣本中目標蛋白濃度低、樣本基質(zhì)效應。

解決辦法是使用陽(yáng)性質(zhì)控品對照測試和重復測試。至少將樣本稀釋1倍檢測，并用回收測試確定基質(zhì)效應是否消除，選擇樣本稀釋后呈梯度下降的稀釋倍數計算結果

標準蛋白反應好，但樣本檢測信號過(guò)高？

原因是樣本目標蛋白量過(guò)高、樣本存在非特異性反應酶。

解決辦法是使用稀釋液稀釋樣本，重復測試。選擇樣本稀釋后呈梯度下降的稀釋倍數計算結果。使用前確認樣本是否存在特殊情況，并處理樣本。

讀數值過(guò)低？

可能原因是讀數波長(cháng)選擇錯誤，顯色時(shí)間過(guò)短。

解決辦法是選擇正確的主、 次波長(cháng)讀數。顯色時(shí)間控制在15-25min最佳，不超過(guò)30min。

跳孔？

可能原因是洗板中不當操作、加樣錯誤。

解決辦法是洗板中不當操作，引起孔間的交叉污染。加樣錯誤造成不符合預期的顯色發(fā)生。