細胞培養是大多數生物實(shí)驗室都會(huì )遇到的基礎實(shí)驗，但不是非常簡(jiǎn)單的實(shí)驗。細胞培養蘊含著(zhù)大學(xué)問(wèn)。細胞培養狀態(tài)不好相信每個(gè)細胞培養者都遇到過(guò)。有時(shí)候細胞狀態(tài)不好，轉染 、藥篩這些實(shí)驗根本就沒(méi)辦法做。影響細胞培養的因素很多，但首要因素是選好合適的細胞培養基。很多研究者只對一兩種培養基比較了解，下面讓我們詳細介紹一下各種培養基的不同之處。

培養基

      基礎培養基絕大多數是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營(yíng)養物質(zhì)。廣泛應用的基礎培養基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。

   目前科研市場(chǎng)經(jīng)典的培養基有很多種，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應用廣泛的培養基。其他如M199、IMDM、L15培養基等也用于某些細胞的培養。

◆ MEM是由基礎培養基(BME)發(fā)展而來(lái)的，其中增加了組分的范圍及濃度。

◆ 改良的基礎培養基培養基也就是我們所說(shuō)的DMEM培養基最初是為小鼠成纖維細胞培養專(zhuān)門(mén)設計的，現在常用于貼壁細胞的培養。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來(lái)為了某些細胞的生長(cháng)需要，將葡萄糖含量又調整為4500 mg/L，這就是大家常說(shuō)的低糖和高糖了。

◆ a-MEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應用于各種細胞類(lèi)型，包括對營(yíng)養成分要求苛刻的細胞。

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細胞而設計的，現在也廣泛應用于克隆形成率的分析及原代培養。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結合的產(chǎn)物，這種培養基已應用于許多原代培養及更難養的細胞系的培養。

◆ RPMI 1640培養基是專(zhuān)為淋巴細胞培養而設計的，現在已廣泛應用于懸浮細胞的培養。

   很多新人經(jīng)常困惑細胞該用哪一種培養基呢?其實(shí)這個(gè)問(wèn)題的答案可以很簡(jiǎn)單，也可以好復雜。如果這種細胞是購自細胞庫，那您直接問(wèn)供應商就行了，他們會(huì )給您一個(gè)很合適的推薦。如您不知道細胞的來(lái)源，您也可以找到相關(guān)的文獻，基本文獻中使用的培養基都可作為參考。但如果你是著(zhù)手建立一種全新細胞的培養體系，根本找不到任何參考，那你就得花點(diǎn)時(shí)間自己試驗。在MEM中培養的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(cháng)?？傊?，選MEM做貼壁細胞培養、RPMI 1640做懸浮細胞培養會(huì )是一個(gè)好的開(kāi)始。最好同時(shí)選購幾種不同的培養基同時(shí)進(jìn)行培養實(shí)驗來(lái)選擇其中特別適合的。有時(shí)候你會(huì )驚訝地發(fā)現你的最佳培養條件與文獻報道的不同，就算是同一種培養條件，細胞的生長(cháng)狀態(tài)也時(shí)好時(shí)壞，這是很正常的。因為試劑、水、不同批號的血清之間都存在著(zhù)差異。要提高培養基的穩定性，可以從培養基和血清兩方面入手。

   以前大部分實(shí)驗室都是用干粉培養基，但干粉有很多弊端

   1. 配制過(guò)程就較為繁瑣，要溶解、調pH值，過(guò)濾，過(guò)程中可能會(huì )產(chǎn)生一些濃度誤差;

   2.有些實(shí)驗室的水質(zhì)并不理想，所以培養的效果會(huì )有差異。

   如果使用液體培養基，這種人為的誤差會(huì )減少，因為畢竟是大批量工業(yè)化生產(chǎn)的，批間差會(huì )很小。

血清

   說(shuō)到細胞培養，血清固然是細胞培養中不可少的成分，但血清的批間差異大，更換血清時(shí)需要做大量的測試以取保替換的血清與原來(lái)的相似。而血清的供應也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病等的影響，血清貨源的問(wèn)題對實(shí)驗的影響可非同小可。另外，血清的價(jià)格也很昂貴，高品質(zhì)的澳洲血清價(jià)格更高。因此，也有一些實(shí)驗室開(kāi)始換用無(wú)血清培養基。

無(wú)血清培養基(Serum-Free Media)

   通常以SFM表示，顧名思義，就是在細胞培養中不需要添加血清，但是在某些應用中可能要添加生長(cháng)因子或細胞因子。無(wú)血清培養基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長(cháng)因子、必需的營(yíng)養物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來(lái)的不利因素，使細胞培養的條件更穩定。但它也不是特別好的，從有血清培養過(guò)渡到無(wú)血清培養的條件并不像想象中那么直截了當。處于發(fā)育的不同分化階段的細胞(例如干細胞與定向前體細胞相比)需要不同的配方，對生長(cháng)因子和細胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時(shí)，也去除了一些血清蛋白具有的保護、解毒作用，因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價(jià)格也比普通的培養基貴很多。

細胞培養基應用選擇
    選擇培養基沒(méi)有固定的標準，有幾點(diǎn)建議可供您參考：
（1） 建立某種細胞株所用的培養基應該是培養這種細胞第一個(gè)要選的培養基?？梢圆殚唴⒖嘉墨I，或在購買(mǎi)細胞株時(shí)咨詢(xún)。
（2） 其它實(shí)驗室慣用的培養基不妨一試，許多培養基可以適合多種細胞。
（3） 根據細胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗的需要來(lái)選擇培養基。如小鼠細胞株多選 RPMI1640。
（4） 用多種培養基培養目的細胞，觀(guān)察其生長(cháng)狀態(tài)，可以用生長(cháng)曲線(xiàn)、集落形成率等指標判斷，根據實(shí)驗結果選擇最佳培養基，這是最客觀(guān)的方法，但比較繁瑣。

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