如何使用聚乙二醇獲得高質(zhì)量純化質(zhì)粒

都知道大量提取的質(zhì)粒DNA一般需進(jìn)一步純化，常用柱層析法和氯化銫梯度離心法。常使用的所有純化方法都利用了質(zhì)粒DNA 相對較小及共價(jià)閉合環(huán)狀這樣兩個(gè)性質(zhì)。例如，用氯化銫－溴化乙錠梯度平衡離心分離質(zhì)粒和染色體DNA 就取決于溴化乙錠與線(xiàn)狀以及與閉環(huán)DNA分子的結合量有所不同。但是此類(lèi)方法也存在了一些例如使用化學(xué)物質(zhì)誘導質(zhì)粒突變的弊端，所以新的純化方式的摸索很有必要的。

其中很好的方法，也應是聚乙二醇分級沉淀法。首先我們了解一下什么是聚乙二醇(PEG)，聚乙二醇是一種高分子聚合物，化學(xué)式是HO(CH2CH2O)nH，無(wú)刺激性，味微苦，具有良好的水溶性，并與許多有機物組分有良好的相溶性。

PEG為一種非離子多聚物，多離子多聚物是六十年代發(fā)展起來(lái)的一類(lèi)重要沉淀劑?；诙嗑畚锏某恋碜饔弥饕蕾?lài)于多聚物的濃度和被沉淀物的分子量大小，Laurent等(1967)提出PEG的沉淀機理主要是通過(guò)空間位置排斥，使液體中的微粒(包括生物大分子、病毒和細菌等)被迫集聚在—起而引起沉淀的發(fā)生。PEG最早應用于提純免疫球蛋白(IgG)和沉淀一些細菌病毒，后來(lái)逐漸應用于核酸和酶的分離純化，特別是用PEG分離質(zhì)粒DNA，已相當普遍。

那么如何利用PEG進(jìn)行質(zhì)粒純化呢？

下面介紹一下PEG純化質(zhì)粒的一般操作步驟：

1   向質(zhì)粒溶液中加入等體積的用無(wú)菌的1.6M NaCl配置的13% w/v PEG 8000；

2   將試管內的物質(zhì)渦旋充分混勻，然后-20°C孵育1 h至過(guò)夜

3   最高轉速 4°C離心30 min；

4   輕柔吸取去上清，收集沉淀；

5   用500 μl 70% 乙醇沖洗顆粒，并短暫渦旋；

6   最高轉速 25°C離心5 min，去除70% 乙醇；

7   再次離心去除酒精，干燥沉淀后溶解。

該操作的優(yōu)點(diǎn)在于：操作條件溫和，不易引起生物大分子的變性。同時(shí)具有很高的沉淀效能，少量的PEG可以沉淀相當多的生物大分子。