細胞培養：一般細胞處理

處理培養細胞

從 19 世紀末開(kāi)始，科學(xué)家們就從各種生物體（例如人類(lèi)、小鼠、豬、雞和植物）中分離出自然環(huán)境中的細胞，并將它們置于體外（拉丁語(yǔ)“玻璃中"）中。 ） 文化。實(shí)驗細胞是從許多不同的組織和器官中提取的，例如腸、腎、血液、腦、乳腺和許多癌癥實(shí)體。

體外培養細胞的目的是模擬培養箱內的體內（拉丁語(yǔ)“活體中"）條件，或者在進(jìn)行活細胞成像時(shí)甚至在顯微鏡下模擬體內條件。每種細胞類(lèi)型都需要定制培養參數，以實(shí)現最佳的健康、活力和生長(cháng)。對于所有實(shí)驗，保持條件無(wú)菌、均質(zhì)和可重復至關(guān)重要，以獲得可比較的結果。

傳代、接種和冷凍細胞

為了保持細胞處于增殖狀態(tài)，并防止它們達到過(guò)度匯合，以規定的時(shí)間間隔進(jìn)行傳代非常重要。必須定期進(jìn)行細胞傳代，以保持細胞處于培養狀態(tài)、實(shí)現體積放大或在實(shí)驗開(kāi)始時(shí)接種它們。該過(guò)程也稱(chēng)為細胞分裂或傳代培養。除其他因素外，傳代的最佳時(shí)間取決于增殖率以及所需的細胞數量。每種細胞類(lèi)型的確切裂解方案都是b的。一般來(lái)說(shuō)，貼壁細胞使用蛋白水解酶（主要是胰蛋白酶/EDTA）從基質(zhì)上分離，這對于消化其蛋白質(zhì)附著(zhù)鍵是必需的。接下來(lái)，將細胞勻漿、計數并接種到新容器中，從而將傳代次數增加一倍。

傳代/傳代=將細胞轉移到新鮮的培養皿和生長(cháng)培養基中

一些細胞系，例如 HeLa 或其他缺乏細胞周期調節的癌細胞，可以無(wú)限傳代而不喪失分裂能力（永生細胞系）。此外，某些胚胎細胞類(lèi)型或多能干細胞也是如此。其他細胞，特別是原代細胞（例如，從成體器官中分離的細胞），在幾次傳代后將失去這種能力，因為它們要么經(jīng)歷衰老，要么分化，要么死亡。因此，使用具有相似傳代數的細胞進(jìn)行可重復的實(shí)驗非常重要。

對于細胞接種，需要選擇適合各自細胞類(lèi)型、細胞培養容器和實(shí)驗裝置的密度。如果密度太低，細胞可能會(huì )由于生長(cháng)因子釋放到培養基中不足而停止生長(cháng)。缺乏細胞間和細胞間基質(zhì)通訊的單個(gè)細胞甚至可能因一種特殊形式的程序性細胞死亡（稱(chēng)為失巢凋亡）而死亡。如果接種密度太高，細胞可能在很短的時(shí)間內就已經(jīng)達到過(guò)度匯合。這會(huì )導致增殖受損和細胞與基質(zhì)分離，從而導致實(shí)驗條件不可重復。

標準細胞類(lèi)型可在 –80°C 下短期保存，或在液氮中長(cháng)期保存。為此，需要對細胞進(jìn)行胰蛋白酶化、均質(zhì)化和離心，然后使用特殊的冷凍介質(zhì)進(jìn)行冷凍。為了對抗此過(guò)程引起的細胞應激，建議使用具有高回收率的冷凍介質(zhì)。此外，解凍過(guò)程必須快速進(jìn)行（例如，在37°C的水浴中），然后將細胞轉移到培養基中并將其放入培養箱中以創(chuàng )造生理條件。