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免疫細胞化學(xué)是一種利用特異性抗體體檢測抗原, 并且可以在顯微鏡下觀(guān)察細胞內抗原定位的方法。在IC中經(jīng)常會(huì )使用熒光進(jìn)行檢測。
主要有兩種方法:直接法、間接法。
直接法:是直接在第一抗體上附上熒光標記 進(jìn)行檢測(直接法)。
間接法:是熒光標記的第二抗體與第一抗體反應并進(jìn)行檢測。
使用直接法時(shí),通過(guò)熒光染色可以更容易的進(jìn)行多重染色。在這種情況下,我們需要找到熒光間不會(huì )相互干擾的組合。
直接法的優(yōu)點(diǎn): 1.特別是使用熒光標記的第一抗體 時(shí),易于進(jìn)行多重染色。
2.不會(huì )出現第二抗體引起的非特異性染色。
3.可以縮短操作時(shí)間。
間接法的優(yōu)點(diǎn):
如果使用的第一抗體來(lái)自相同的宿主,那么可以使用相同的標記第二抗體,且較為通用。
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