如何挑選內參抗體

什么是內參？

Western Blot常用來(lái)比較不同條件下或不同細胞組織中目標蛋白表達量的相對多少，因此必須先確定上樣量相同，才有比較的基礎。在Western Blot實(shí)驗中，可能因總蛋白濃度測定不準確，或是蛋白質(zhì)上樣時(shí)因操作產(chǎn)生誤差，所以必須設置內部參照組來(lái)進(jìn)行校正。此內部參照必須在不同細胞或組織間表達相對恒定，且有高水平的表達量，來(lái)確保不同樣品間蛋白定量相同。而這樣的參照蛋白，就稱(chēng)為內參，對應的抗體就稱(chēng)為內參抗體。

內參在WB實(shí)驗中的重要性。

1 用于校正蛋白水平，確保不同樣品間蛋白定量（上樣量）相同?？蓮臈l帶粗細初步判定上樣量是否有差異。進(jìn)一步使用影像分析程序將目標蛋白量除以?xún)葏⒑?，所得到的數值即為校正后的目標蛋白相對含量，如此就可以進(jìn)行目標蛋白相對量的比較。

2 確認轉膜、顯色等步驟是否均勻轉移、呈色。內參一般選用高表達的蛋白，因此也可通過(guò)內參的條帶，觀(guān)察WB實(shí)驗中的轉膜、顯色等步驟是否有異常。

3對文章發(fā)表絕對重要，增加實(shí)驗的可信度。文章內放上內參的數據，較有說(shuō)服力，文獻審核者也會(huì )較相信實(shí)驗數據。

如何挑內參抗體

通常會(huì )挑選各細胞或組織間穩定表達、并且不受實(shí)驗影響的蛋白作為內參，但不同的實(shí)驗還是有一些細節要注意，挑選內參可參考下面四點(diǎn)：

常用內參請見(jiàn)下表：